印跡膜有什么特點
標簽： 轉印膜
生物印跡技術是將待測生物大分子結合到一定固相支持物（微濾膜）上的方法。主要印跡技術有Northern印跡、Southern印跡。生物印跡技術中的印跡膜是專門用于分離和檢測生物分子（如蛋白質、核酸、細胞等）的材料。
| 目錄 |
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1、Northern印跡、Southern印跡、Western印跡區(qū)別對比 2、印跡膜特性
3、印跡膜性能驗證 4、邁博瑞印跡膜參數(shù) |
一、Northern印跡、Southern印跡、Western印跡區(qū)別對比
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Southern blot
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Northern blot
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Western blot
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定義 |
用于識別特定DNA序列的程序 |
Southern blot的改編，通過與互補DNA的雜交來檢測特定RNA序列 |
用于鑒定蛋白質中特定氨基酸 序列的印跡程序 |
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開發(fā)者 |
1975年，愛德華 |
1977年，詹姆斯.阿爾溫等人 |
1979年，喬治.斯塔克 |
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檢測到的分子類型 |
特異性DNA序列 |
特異性RNA序列 |
特定蛋白質 |
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電泳 |
瓊脂糖凝膠電泳 |
甲醛瓊脂糖凝膠電泳 |
SDS PAGE/聚丙烯酰胺凝膠 |
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印跡程序 |
毛細管轉移 |
毛細管轉移 |
電動傳輸 |
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探針 |
DNA探針 |
cDNA探針 |
一抗和二抗 |
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樣本制備 |
變性處理 |
自然狀態(tài) |
自然狀態(tài) |
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應用 |
檢測給定樣品中特定DNA序列 |
識別給定樣品中特定RNA序列 |
識別給定樣品中的蛋白質數(shù)量 |
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檢測系統(tǒng) |
放射自顯影、光檢測和顏色變化 |
放射自顯影、光檢測和顏色變化 |
檢測光線和顏色變化 |
二、印跡膜特性
1、印跡膜作為印跡技術中的重要固相支持物的主要特性
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名稱 |
特點 |
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NC 印跡膜 |
無支撐布 不添加洗滌劑 100% 純硝化纖維 高蛋白結合能力 毛細管率與厚度一致 背淺 |
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PVDF 印跡膜 |
耐化學性 無變色 非易燃 高強度 疏水性 背景淺 高蛋白結合 |
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尼龍印跡膜 |
親水性 高強度 高化學耐受性 高蛋白結合力 |
2、NC印跡膜、尼龍印跡膜和PVDF印跡膜的區(qū)別
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正電尼龍印跡膜 |
硝酸纖維素印跡膜 |
PVDF印跡膜 |
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DNA或RNA截留力 |
480-600ug/cm2 |
80-100ug/cm2 |
125-300ug/cm2 |
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蛋白截留力 |
500ug/cm2 |
80-100ug/cm2 |
100-300ug/cm2 |
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結構強度 |
柔韌、耐化學試劑，可重復剝離 |
膜脆、易破碎，不可重復使用 |
強度高、耐高溫、可重復剝離 |
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吸附力 |
電荷和疏水作用 |
疏水作用和電荷 |
疏水作用和電荷 |
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是否需活化 |
無需活化 |
無需活化 |
需要活化 |
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檢測方法 |
放射性標記探針 |
放射性標記探針 |
直接染色 |
三、印跡膜性能驗證
- 印跡膜對生物分子的最大吸附能力驗證
- 印跡膜轉印生物分子效果驗證
- 印跡膜轉印燒穿檢測驗證
- 轉印膜背景及靈敏度（最低檢測限度）驗證
- 轉印膜吸附生物分子作用力（疏水和電荷）驗證
四、邁博瑞印跡膜參數(shù)
| 名稱 | 濕潤性 | 靈敏度和分辨率 | 背景 | 機械強度 | 溶劑耐受性 | 水潤性 | 蛋白結合能力 | 適用染色方法 | 檢測方式 |
| Nylon66印跡膜 | 親水性 | 高 | 較高 | 軟而結實 | 較差 | 緩沖溶液潤濕 | >400μg/cm2 | 不能用陰離子染料 | 不能用陰離子染料，受限制 |
| NC轉印膜 | 親水性 | 高 | 低 | 干的NC膜易脆 | 差 | 緩沖溶液潤濕，避免氣泡 | 80-110μg/cm2 | 膠體金、麗春紅、酰胺黑、印度墨汁 | 常規(guī)染色，可用放射性和非放射性檢測 |
| PVDF轉印膜 | 疏水性 | 高 | 淺 | 機械強度高 | 好 | 100%的甲醇潤濕 | 125-200μg/cm2 | 膠體金、麗春紅、酰胺黑、印度墨汁、考馬斯亮蘭 | 常規(guī)染色，較于NC膜可用考馬斯亮藍染色，ECL檢測和快速免疫檢測 |
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