NC轉(zhuǎn)印膜、PVDF轉(zhuǎn)印膜、正電荷尼龍轉(zhuǎn)印膜的優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比
標(biāo)簽： 轉(zhuǎn)印膜
| 目錄 |
| 1、什么是Western Blot 2、NC轉(zhuǎn)印膜、PVDF轉(zhuǎn)印膜、正電荷尼龍轉(zhuǎn)印膜的優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比 3、邁博瑞轉(zhuǎn)印膜推薦 |
一、什么是Western Blot
就像與SDS提供的電荷結(jié)合一樣，蛋白質(zhì)可以在電場(chǎng)中從凝膠轉(zhuǎn)移到堅(jiān)固的載體上，即從凝膠中“印跡”到膜。這種方法被稱(chēng)為蛋白免疫印跡轉(zhuǎn)印。
蛋白免疫印跡法中蛋白從凝膠轉(zhuǎn)印到膜上
轉(zhuǎn)膜方式主要有兩種：濕轉(zhuǎn)和半干轉(zhuǎn)。兩者原理相同，只是用于固定膠/膜疊層及施加電場(chǎng)的儀器有不同。半干轉(zhuǎn)耗時(shí)短，但是更適合小分子蛋白的轉(zhuǎn)印，而濕轉(zhuǎn)蛋白分子量范圍較寬，在Western Blot實(shí)驗(yàn)中，常用的是濕轉(zhuǎn)。
二、NC轉(zhuǎn)印膜、PVDF轉(zhuǎn)印膜、正電荷尼龍轉(zhuǎn)印膜的優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比
在蛋白質(zhì)和核酸的轉(zhuǎn)移和檢測(cè)過(guò)程中，我們都常用的轉(zhuǎn)印膜有三種：正電荷尼龍轉(zhuǎn)印膜/硝酸纖維素NC轉(zhuǎn)印膜/聚偏二氟乙烯膜PVDF轉(zhuǎn)印膜。不同的轉(zhuǎn)印膜規(guī)格和參數(shù)不同。選擇正確、均一穩(wěn)定的轉(zhuǎn)印膜對(duì)達(dá)到最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果起到關(guān)鍵性作用。
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PVDF轉(zhuǎn)印膜 |
NC轉(zhuǎn)印膜 |
正電荷尼龍轉(zhuǎn)印膜 |
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機(jī)械強(qiáng)度高、質(zhì)地柔韌、易于保存 |
極易破碎不易操作 |
高的靈敏度和 |
在蛋白免疫印跡法中，可根據(jù)靶蛋白分子大小選擇0.2 µm或0.45 µm孔徑的膜。在大多數(shù)應(yīng)用中，PVDF和硝酸纖維素是等效的。請(qǐng)注意，PVDF的容量高于硝酸纖維素，但需要更仔細(xì)的預(yù)處理：根據(jù)凝膠大小將膜切割成適當(dāng)大小，通常比凝膠稍大一點(diǎn)；在甲醇中浸泡約30秒；在ddH2O中清洗約1分鐘，然后在冰冷的轉(zhuǎn)印緩沖液中孵育5分鐘。凝膠還需要在冰冷的轉(zhuǎn)印緩沖液中平衡3-5分鐘。
三、邁博瑞轉(zhuǎn)印膜推薦
MS®轉(zhuǎn)印膜主要是參與Southern印跡雜交和Northern印跡雜交實(shí)驗(yàn)，用于實(shí)現(xiàn)基因診斷，通常都是將雜交結(jié)果轉(zhuǎn)移到印記膜上，作為最終判斷依據(jù)。印跡膜有多種形式：0.2um和0.45um的PVDF轉(zhuǎn)印膜、硝酸纖維素轉(zhuǎn)印膜、（Nylon66）尼龍轉(zhuǎn)印膜，這是一種經(jīng)驗(yàn)證的western 雜交介質(zhì)，PVDF用于高載量免疫印跡和蛋白測(cè)序。
| 名稱(chēng) | 濕潤(rùn)性 | 靈敏度和分辨率 | 背景 | 機(jī)械強(qiáng)度 | 溶劑耐受性 | 水潤(rùn)性 | 蛋白結(jié)合能力 | 適用染色方法 | 檢測(cè)方式 |
| Nylon66印跡膜 | 親水性 | 高 | 較高 | 軟而結(jié)實(shí) | 較差 | 緩沖溶液潤(rùn)濕 | >400μg/cm2 | 不能用陰離子染料 | 不能用陰離子染料，受限制 |
| NC轉(zhuǎn)印膜 | 親水性 | 高 | 低 | 干的NC膜易脆 | 差 | 緩沖溶液潤(rùn)濕，避免氣泡 | 80-110μg/cm2 | 膠體金、麗春紅、酰胺黑、印度墨汁 | 常規(guī)染色，可用放射性和非放射性檢測(cè) |
| PVDF轉(zhuǎn)印膜 | 疏水性 | 高 | 淺 | 機(jī)械強(qiáng)度高 | 好 | 100%的甲醇潤(rùn)濕 | 125-200μg/cm2 | 膠體金、麗春紅、酰胺黑、印度墨汁、考馬斯亮蘭 | 常規(guī)染色，較于NC膜可用考馬斯亮藍(lán)染色，ECL檢測(cè)和快速免疫檢測(cè) |
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